Merci de votre intérêt pour la diffusion du mot sur les modèles et mécanismes de la maladie. Les études animales ont été conformes au protocole G-05-4, qui a été approuvé par le Comité des soins et de l`utilisation des animaux de la NHGRI (instituts nationaux de la santé, Bethesda, MD, États-Unis). Des cerveaux provenant d`embryons de souris déficients en GBA ou de C57BL/6 au jour 17 (17E) ont été récoltés et placés dans des milieux de dissection à froid [10 ml de L15, 0,15 ml de tampon HEPES, et 0,15 ml PEN/STREP (Life Technologies, Grand Island, NY, USA)]. Les méninges ont été enlevés, les cortex ont été isolés, hachés et incubées pendant 45 min à 37 ° c en solution de papaïne avec DnaseI (Worthington biochimiques Corporation, Lakewood, NJ, USA). Les cortex hachés ont été doucement trituré (10-15 fois) suivis par centrifugation à 164 g pendant 5 min à température ambiante (RT). Le surnageant a été enlevé et le culot cellulaire a été resuspendu en 500 μl d`inhibiteur de papaïne (Worthington biochimiques Corporation) avec DNaseI. Après 10 min, solution d`arrêt a été aspirés et 10 ml d`une solution 10/10 HBSS (Life Technologies), 0,1 g inhibiteur de trypsine (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA), 0,1 g BSA fraction V (Sigma Aldrich) a été ajouté aux cellules réglées. Les cellules ont été filées à 105 g pendant 10 min. Après avoir enlevé le surnageant, les pastilles de cellules ont été resuspendues dans des milieux de croissance neurobasal de 2 ml [500 ml neurobasal Media, 1:50 (v/v) 17, 1:200 (v/v) glutamine, et 25 mM HEPES (Life Technologies)]. 500 μl de suspension cellulaire avec 2,5 ml de milieux de croissance neurobasal a été ajouté à chaque puits d`une plaque de 6 puits préenduite de poly-L-lysine (Sigma Aldrich). 50% des milieux de croissance neurobasal ont été changés tous les 3 jours. DMM vise à promouvoir la santé humaine en encourageant la collaboration entre les chercheurs de base et cliniques, couvrant une gamme variée de maladies, d`approches et de modèles.

Nos rédacteurs sont tous des chercheurs actifs sur le terrain-vos pairs, collègues et mentors, qui savent combien de travail est allé dans chaque journal. DMM offre une soumission sans format et accepte les rapports d`examen par les pairs d`autres revues, rendant la soumission aussi facile que possible pour nos auteurs. Envoyez-nous votre prochain grand article-publiez avec nous et vous serez en bonne compagnie. Des lysats cellulaires ont été préparés dans le tampon d`extraction citrate-phosphate [150 mM tampon citrate-phosphate pH 5,4, 0,25% Triton X-100, mélange inhibiteur de protéase (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA)] et sonication pour 20 s à 50% d`amplitude à l`aide d`un tissu mécanique homogénéisateur (Omni international, Kennesaw, GA, USA). Les homogates cellulaires ont ensuite été centrifugés à 10 000 g pendant 15 min à 4 ° c. L`activité enzymatique de GCase a été mesurée dans un tampon de dosage composé de tampon citrate-phosphate (pH 5,4) avec 10 mM de 4-méthylumbelliféryl-β-D-glucopyranoside (Sigma Aldrich). L`homogénéisat cellulaire (5 μl) a été ajouté à chaque puits individuel d`une plaque noire 384-Well (VWR International, Bridgeport, NJ, USA) et chaque échantillon a été lu en triple exemplaire. Pour corriger l`activité cytosolique gba2, on a ajouté 5 μl d`une solution CBE de 100 μm (Sigma Aldrich) en trois exemplaires et le tampon de dosage a été pipetté à chaque puits pour ramener le volume total de dosage à 30 μl.

La plaque a été brièvement centrifugée puis incubée à 37 ° c pendant 1 h à 600 tr/min. Les mélanges de réaction ont été trempés par l`addition de 30 μl de solution d`arrêt (1 M de glycine, pH 12,5) et la fluorescence a été mesurée à l`aide d`un lecteur de microplaques multimodes FlexStation 3 (dispositifs moléculaires, Sunnyvale, CA, USA), à λex = 520 nm et λem = 440 nm.